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用氯化铯离心法纯化噬菌体

更新时间:2012-12-25点击次数:1516

1.在每毫升zui后的噬菌体悬液(例如来自实验方案13.11)中,加入0.45 g氯化铯,充分混匀至溶解。
2.用吊桶式转头 (或与其相当的型号) 离心溶液,15℃17h,噬菌体将浓缩在组分1和组分2中(。组分1的浓度较高,但组分2的体积较大。用巴氏滴管或塑料注射器吸取这些组分。如果是*次使用本实验方案,那么先收集所有条带并分别对其检测将是明智之举。
3.将收获的溶液对PBS透析过夜。
4.通过感染大肠杆菌DH5cF,或TGl滴定各个不同组分中噬菌体,并保存滴度zui高的组分。通常,噬菌体会集中在1个区带内,而较少的数量会分散在其他区带(如果可见)。加入甘油至10%;按每份样本1013个噬菌体等量分装并储存于-80℃。更进一步的质量控制则可进行蛋白杂交印迹,采用抗标签抗体或抗pⅢ抗体。

用氯化铯纯化噬菌粒。
离心后离心管外观如图示。噬菌体主要浓缩于碎片样区带(组分1)和其下的乳白色区带(组分2)。两条区带均需收集

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