NEXTFLEX™ 游离 DNA 测序文库制备试剂盒 2.0 专为液体活检与胎儿游离 DNA 检测流程设计，仅需 10 纳克来源于血浆、血清或其他生物流体的游离 DNA，最快 2 小时即可制备成可上机测序的文库，同时保留游离 DNA 原本的片段特征。
无论研究目标是循环肿瘤 DNA（ctDNA）还是胎儿游离 DNA（cffDNA），该试剂盒采用单管末端修复 / A 尾加尾 + 连接反应体系，可降低 GC 偏好性，产出高复杂度文库，可靠检出高 GC、高 AT 以及其他难测序区域内的低频变异。
构建的文库兼容 Illumina®（NovaSeq™、NextSeq™、MiSeq™）以及 Element Biosciences® AVITI™平台；整套实验流程支持自动化操作，配套有适用于 Revvity 液体处理工作站的自动化方案。
针对大队列研究，可搭配多达 1536 种 NEXTFLEX 独特双索引（UDI）条形码，在单张流动池上对数千份样本进行多重测序，同时将索引串扰降至低。若需要单分子纠错（例如微小残留病灶或极罕见变异检测场景），可选用 96 重 NEXTFLEX UDI-UMI 接头。该接头嵌入 9 个碱基的独特分子标识符，能够抑制 PCR 与测序错误，并消除索引跳变问题。
NEXTFLEX Cell Free DNA-Seq Library Prep Kit 2.0
产品概述
NEXTFLEX 无细胞 DNA 测序试剂盒 2.0 将多步骤 cfDNA 建库流程简化为稳定、精简且适配自动化操作的工作流程，消除了常见的通量与标签索引瓶颈，降低了限制液体活检、产前检测以及移植监测相关研究的偏好性。以下优势展现了 NEXTFLEX 无细胞 DNA 建库试剂盒 2.0 如何节约珍贵的血浆或血清样本，可满足从预实验到群体研究的不同样本规模需求，并且能够无缝接入 Illumina 和 Element 测序流程。
低起始量：仅需 10 ng cfDNA 即可获得稳定实验结果，节约珍贵的液体活检样本
快速交付结果：整套流程耗时 2 小时，人工操作时间短，加快获取结果的速度
高文库复杂度：经过优化的连接反应体系提升读段数量，降低重复序列占比
低偏好性：均一的基因组覆盖度提升对单核苷酸变异、插入缺失、拷贝数变异及非整倍体的检测灵敏度
灵活多样本混测：配备 1536 个双索引（UDI）或 96 组 UDI-UMI 组合，可抑制索引跳跃现象，支持错误校正
适配自动化平台：已在 Revvity 液体处理仪上完成方案验证，支撑可规模化的临床研究工作流
多平台兼容：已在 Illumina 与 Element Biosciences 测序仪上验证，便于各类实验室使用
低投入量游离 DNA（cfDNA）性能仅需 10 纳克来源于血浆或血清的游离 DNA（cfDNA），即可构建高深度测序文库，该含量通常可从不足 3 毫升样本中提取获得。本产品的化学体系可保留游离 DNA 天然片段特征，这类片段带有核酸酶切割所产生的典型 5' 磷酸末端与 3' 羟基末端。这意味着，你可以使用这类微量起始样本开展早期癌症图谱分析或无创胎儿游离 DNA 检测，无需采用会导致变异判读出现偏差的预扩增或全基因组扩增技术。
图 1：采用 NEXTFLEX 游离 DNA 测序试剂盒 2.0，以 10 纳克血浆游离 DNA 构建的游离 DNA 文库电泳图显示，在约 320 碱基对处出现清晰主峰，接头二聚体可忽略不计，低起始量样本检测性能高度稳定。
整合式单管末端修复 / A 尾添加步骤合并多项酶促反应，磁珠纯化体系经过优化，可实现快速结合与洗脱。整套实验流程从开始到结束约 2 小时，手动移液操作少，可在同一班次内完成从样本接收至测序仪上样。减少实验台操作时长，让实验人员可投入更高价值工作，降低移液操作误差，助力实验室达成严苛的样本周转时限要求。
经过优化的连接反应体系与精准校准的接头化学计量比，最大限度提升单片段标记效率，减少接头二聚体与 PCR 重复序列生成，增加最终进入流动槽的独特游离 DNA 分子数量。同时，针对盐、聚乙二醇与酶浓度调配的均衡缓冲基质，可抑制序列偏好性，实现从端粒到端粒，在高 GC、高 AT 以及重复序列区域均获得均一覆盖。由此带来的高文库复杂度与均衡的基因组代表性，可获得更深的有效测序深度以及更精准的定量分辨能力，可靠检出低频单核苷酸变异、插入缺失、拷贝数变异以及非整倍体，对于微小残留病监测、克隆演化分析以及其他对检测灵敏度要求高的应用至关重要。
可选用 1536 组 NEXTFLEX 独特双标签（UDI）组合，在单个流动槽中混合数千份样本，标签交叉污染极低；若需对超罕见变异或微小残留病检测进行单分子纠错，可选用 96 重 NEXTFLEX® 独特双标签 - 分子标签（UDI-UMI）套装。两种标签体系均可无缝适配 Illumina® 与 Element Biosciences® 实验流程，无需更改核心实验方案，灵活调整测序通量或检测精度。
针对高多重游离 DNA 研究，PCR 扩增后使用 NEXTFLEX 二代测序文库标准化磁珠，均衡各文库摩尔浓度并直接混样，节省时间，降低各样本测序读段的波动。磁珠法标准化可保留游离 DNA 原始片段分布特征，规模化实验下仍能维持稳定、深度的测序覆盖。
上海宝叶生物科技有限公司
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